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    細(xì)胞不長(zhǎng),這些方面您注意了嗎?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-10-25  點(diǎn)擊次數(shù): 1593次

    Q1

    培養(yǎng)液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響?

    答:由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響,目前也有些無(wú)血清培養(yǎng)基或者轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)基PH值會(huì)在6.5左右。因?yàn)楦鞣N細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來(lái)說(shuō),細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí),需要注意一點(diǎn):培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí),溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右


    Q2

    培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些?其解決方法是什么?


    答:通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非??鞎r(shí),pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外,培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。

        (1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。

        (2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。

        (3)松開(kāi)瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

        (4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。

        (5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。


    Q3

    培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?



    答:丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒(méi)有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

    Q4

    Hank′s平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?


    答:HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中,溶液會(huì)變堿,Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織,用Hanks′液就可以了。


    Q5

    培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2,或者根本沒(méi)有影響?



    答:一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí),則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。


    Q6

    培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)死亡其可能的原因有什么?解決辦法有哪些?



    答:可能的原因有培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2;培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大;細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷;培養(yǎng)液滲透壓不正確;培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積等。

         解決辦法可以檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;取新的保存細(xì)胞種;檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓,換入新鮮培養(yǎng)液等。


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