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siRNA轉(zhuǎn)染操作及要點
發(fā)布時間: 2023-08-07 點擊次數(shù): 1044次轉(zhuǎn)染試劑儲存
轉(zhuǎn)染試劑-20°C避光保存,Trans Enhancer于2-8°C存放
體外轉(zhuǎn)染操作流程
1:細胞接種:轉(zhuǎn)染前一天接種細胞,使細胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%
2:siRNA-Starvio 轉(zhuǎn)染復合物準備:Starvio 用25ulTrans Enhancer 稀釋室溫孵育5min將siRNA稀釋液與 Starvio 稀釋液混合(總體積50ul)
將轉(zhuǎn)染復合物加到培養(yǎng)的細胞內(nèi)
注意事項
1:建議對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化,特別是第一次使用。例如:24孔培養(yǎng)板,siRNA 用量在 6、12、18、24、30 pmol之間調(diào)整;
2:Starvio 試劑用量在1.0-3.0ul之間調(diào)整;
3:轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素,否則會導致細胞死亡;
4:增加計算接種細胞的數(shù)量,使轉(zhuǎn)染時細胞密度在30-50%左右。
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